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织物和家居护理产品

来源:老子有钱注册送28   发布时间:2019-11-26   点击量:273

织物和家居护理产品

本发明涉及包含一种或多种冷水蛋白酶的织物和家居护理产品,以及用于制造和使用此类产品的方法。此类组合物提供改善的清洁和新鲜度。此类冷水蛋白酶可通过对一个或多个亲本酶的氨基酸的取代、插入和/或删除而来源于亲本酶,所述亲本酶包括BPN′枯草杆菌蛋白酶和来源于迟缓芽孢杆菌的枯草杆菌蛋白酶。

在所述组合物的一个方面,所述组合物包含第二非免疫等价蛋白酶,所述蛋白酶选自由下列组成的组:

将表达质粒的枯草芽孢杆菌菌株划线接种至包含lOppm新霉素的1.6%脱脂乳平板上,并在37°C生长过夜。使来自上述平板的单菌落在5ml包含lOppm新霉素的Luria肉汤中于37°C以250rpm摇动生长过夜。采用QIAGEN®Miniprep试剂盒规程提取了质粒,其中向缓冲液P1中添加了1微升的ReadyLyse溶菌酶(Epicentre)在37°C孵育15分钟,以帮助细胞裂解。在进行后续步骤前,对质粒进行了测序以保障DNA序列正确。用NEB的DamMethylase试剂盒通过反应使上述质粒甲基化,反应包含77.5μ1的水+10μ1缓冲液10Χ+0.25μ1的SAM+2μ1的DAM甲基化酶+10μ1的微量提纯DNA(~150ng/μL),于37°C过夜。使用DNACleanandConcentrator试剂盒(Zymo)或QIAGEN®PCR纯化试剂盒纯化了甲基化的质粒DNA。多重位点QUIKCHANGE®诱变反应被设定为对每种DNA模板而言在反应混合液中包含2.5μ1缓冲液5X+0.75μ1的QuikSolution+0.5μ1的引物1(2541)+0.541的引物2(2541)+1.5以1的〇1阶?/3+141的酶共混物+16.2541的Η20+2μ1的DNA。所使用的PCR程序为:95°C进行1分钟;(95°C进行1分钟,53°C进行1分钟,65°C进行10分钟)χ29个循环;65°C进行10分钟,4°C保持。在全部的反应中,PCR使用MJResearchPTC_200Peltier热循环仪进行。通过向37°C过夜的QUIKCHANGE®诱变试剂盒反应加入1μ1的Dpnl,从PCR样品中除去了亲本DNA。使用IllustraTempliphi试剂盒,按照制造商的规程,通过滚环扩增(RCA)扩增了经Dpnl消化的反应,以提高转化率。用每种RCA反应luL转化了枯草芽孢杆菌细胞(AaprE,AnprE,amyE::xylRPxylAcomK-phleo),并将转化的细胞铺于包含lOppm新霉素的LA+1.6%脱脂乳平板上,于37°C孵育过夜。选择了来自过夜生长的菌落,以使用"puReTaqReady-To-GoPCRBeads"(Amersham)进行用于测序的菌落PCR。所使用的PCR和测序引物是pHPLTH(SEQIDN0:54))和pHPLTseqR1(SEQIDNO:55。具有适当序列的克隆被冻存。在96孔微量滴定板中,通过使枯草芽孢杆菌转化体于37°C在包含脲的MOPS基培养基中生长68小时,制备了BPN'变体蛋白质。

用于在96孔微量滴定板中测定蛋白质含量的TCA检测法

描沭

96孔微量滴定板中的AAPF蛋白酶检测法

在洗涤剂组合物4中于pH8和16°C进行的测试方法3的BMI微样品清洁检测中,下列BPN'变体被测定为相对于BPN'-v3具有等于约1.0的PI值:包含至少一组选自由G097A-G128S-Y217Q,G097A-G128A-Y217Q,N025G-G097A-S101N-G128A-Y217Q,N025G-S038G-S053G-N061P-S078N-G097A-S101N-G128A-Y217Q,N025G-S053G-N061P-S078N-G128A-Y217Q,N025G-S053G-N061P-S078N-S101N-G128A-Y217Q,N025G-S053G-T055P-N061P-S078N-G097A-S101N-G128A-Y217Q,N025G-S053G-T055P_S078N-G097A-S101N-G128A-Y217Q,N025G-S078N-G097A-G128A-Y217Q,N025G-S078N-G097A-S101N-G128A-Y217Q,N025G-T055P-G097A-G128A-Y217Q,N025G-T055P-N061P-S078N-G097A-S101N-G128A-Y217Q,N025G-T055P-N061P-S078N-S101N-G128A-Y217Q,N061P-S101N-G128A-Y217Q,S024G-G097A-S101N-G128A-Y217Q,S024G-I035V-T055P-N061P-S078N-G097A-Y217Q,S024G-N025G-N061P-G097A-G128A-Y217Q,S024G-N025G-N061P-G097A-S101N-G128A-Y217Q,SO24G-N025G-N061P-S078N-G097A-S101N-G128A,S024G-N025G-N061P_S078N-S101N-G128A-Y217Q,S024G-N025G-S053G-N061P-G097A-G128A-S130G-Y217Q,S024G-N025G-S053G-N061P-G128A-Y217Q,S024G-N025G-S053G-N061P-S078N-G097A-S101N-G128A-Y217Q,S024G-N025G-S053G-T055P-G097A-G128A-Y217Q,S024G-N025G-S053G-T055P-G097A-S101N-G128A-Y217Q,S024G-N025G-S053G-T055P-N061P-G128A-Y217Q,S024G-N025G-S053G-T055P-N061P-S078N-G097A-G128A-Y217Q,S024G-N025G-S053G-T055P-N061P-S078N-G128A-Y217Q,S024G-N025G-S053G-T055P-S078N-S101N-G128A-Y217Q,S024G-N025G-S053G-T055P-S101N-G128A-Y217Q,S024G-N025G-T055P-G097A-G128A-Y217Q,S024G-N025G-T055P-G097A-S101N-G128A-Y217Q,S024G-N025G-T055P-N061P-S078N-G097A-S101N-G128A-Y217Q,S024G-N061P-G097A-S101N-G128A-Y217Q,S024G-N061P-S078N-G097A-S101N-G128A-Y217Q,S024G-S038G-S053G-S078N-S101N-G128A-Y217Q,S024G-S053G-N061P-G097A-G128A-Y217Q,S024G-S053G-N061P-S078N-G097A-G128A-Y217Q,S024G-S053G-S078N-G097A-S101N-G128A-Y217Q,S024G-S053G-S078N-S101N-G128A-Y217Q,S024G-S053G-T055P-G097A-S101N-G128A-Y217Q,S024G-S053G-T055P-N061P-S078N-G097A-G128A-Y217Q,S024G-S053G-T055P-N061P-S101N-G128A-Y217Q,S024G-T055P-G097A-G128A-Y217Q,S024G-T055P-N061P_G097A-G128A-Y217Q,S024G-T055P-N061P-G097A-S101N-G128A,S024G-T055P-S078N-G097A-S101N-G128A-Y217Q,S053G-N061P-G097A-S101N-G128A-Y217Q-S249N,S053G-N061P-S078N-G097A-G128A-Y217Q,S053G-S078N-G097A-S101N-G128A-Y217Q,S053G-T055P-G097A-S101N-G128A-Y217Q,S053G-T055P-N061P-S101N-G128A-Y217Q,S053G-T055P-S078N-G097A-S101N-G128A-Y217Q,S101N-G128A-Y217Q,T055P-G097A-S101N-G128A-Y217Q和T055P-N061P-S078N-G097A-S101N-G128A-Y217Q组成的组的氨基酸取代的BPN'氨基酸序列(SEQIDN0:2),其中所述变体的氨基酸位点的编号与SEQIDNO:2的序列相对应。此类变体在这一检测中具有比BPN'(SEQIDN0:2)更强的蛋白水解活性和比BPN'更高的PI值。本发明包括在这一BMI微样品清洁检测中具有比BPN'(SEQIDN0:2)更强的蛋白水解活性和/或相对于BPN'-v3等于1.0的PI值的蛋白酶变体,所述变体包含与SEQIDN0:2的序列具有至少60%、70%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、或98%或99%的同一性并且包含至少一组选自上文所述的组的氨基酸取代的氨基酸序列,其中所述变体的氨基酸位点的编号与SEQIDNO:2序列的氨基酸位点相对应。还包括了包含至少一种此类变体的组合物(包括但不限于:例如,清洁组合物)和利用至少一种此类变体的用于清洁的方法,如本文中在别处所详述的。

在洗涤剂组合物4中于pH7和16°C进行的BMI微样品清洁检测(测试方法3)中,下列BPN'-v36变体被测定为相对于BPN'-v36具有等于约1.0的PI值:包含至少一组选自由BPN'-v36,A001E-A128S,A001E-G131H,A001E-K256R,A001E-N218S,A001E-N243V,A001E-S033T,A001E-S063G,A001E-S162G,A088T,A088T-K256R,A088T-N218S,A088T-Q103H,A088T-S162G,A088T-T158S,A116T-A128S,A116T-G131H,A116T-K256R,A116T-L257G,A116T-S162G,A116T-S248N,A116T-S249A,A128S-G169A,A128S-N218S,A128S-S162G,A128S-S249A,G024E,G024E-N109G,G024E-Q103H,G024E-S033T,G024E-S063G,G024E-S248N,G131H-L257G,G131H-N243V,G131H-S162G,G131H-T158S,G169A,G169A-L257G,G169A-S248N,K043Y-A128S,K043Y-G131H,K043Y-K256R,K043Y-L257G,K043Y-N109G,K043Y-N243V,K043Y-Q103H,K043Y-S063G,K043Y-S162G,K043Y-S248N,K043Y-S249A,K043Y-T158S,K256R-L257G,L257G,N061G-N109G-N243V,N061S-A128S-N243V-S260P,N061S-N109G-A128S-N243V-S260P,N061S-N109G-A128S-S260P,N076D-A088T,N076D-A128S,N076D-G169A,N076D-N218S,N076D-N243V,N076D-S162G,N076D-S248N,N076D-T158S,N109A-A128S-N243V-K256R,N109G-A128S-G131H-N243V-S248N-K256R,N109G-A128S-N243V-S248A-K256R,N109G-A128S-N243V-S248N-K256R-L257G,N109G-A128S-S162G-N243V-S248N-K256R,N109G-A128S-T158S-N243V-S248N-K256R,N109G-Q206D,N109G-S162G,N109G-S249A,N109G-T158S,N109Q-A128S-N243V-K256R,N109S-A128S-N243V-K256R,N218S,N218S-K256R,N218S-N243V,P040A-N109G-A128S-N243V-S248N-K256R,Q103H,Q103H-A116T,Q103H-G169A,Q103H-N109G,Q103H-N218S,Q103H-S162G,S009T-A128S-K141R-N243V,S009T-N109G-A128S-K141R,S009T-N109G-A128S-K141R-N243V,S009T-S018T-Y021N-N109G-A128S-K141R,S018T-Y021N-N109G-A128S,S018T-Y021N-N109G-A128S-N243V,S018T-Y021N-N109G-A128S-N243V-S248N-K256R,S033T-A088T,S033T-A116T,S033T-G131H,S033T-K043Y,S033T-L257G,S033T-N109G,S033T-Q103H,S033T-Q206D,S033T-S162G,S033T-S249A,S063G,S063G-A088T,S063G-A116T,S063G-L257G,S063G-N076D,S063G-N109G,S063G-N218S,S063G-Q103H,S063G-S248N,S063G-S249A,S162G,S162G-G169A,S162G-L257G,S162G-N218S,S162G-N243V,S162G-S248N,S162G-S249A,S248N,S248N-S249A,S249A-K256R,S249A-L257G,T158S,T158S-G169A,T158S-K256R,T158S-L257G,T158S-N218S和T158S-S248N组成的组的氨基酸取代的BPN'-S024G-S053G-S078N-S101N-G128A-Y217Q氨基酸序列(SEQIDN0:6),其中所述变体的氨基酸位点的编号与SEQIDN0:2的序列相对应。此类变体在这一检测中具有比BPN'蛋白酶(SEQIDNO:2)更强的蛋白水解活性和比BPN'更高的PI值。本发明包括在这一BMI微样品清洁检测中具有比BPN'(SEQIDNO:2)更强的蛋白水解活性,相对于BPN'-v3等于1.0的PI值和相对于BPN'-v36等于1.0的PI值的蛋白酶变体,所述变体包含与SEQIDNO:2或SEQIDN0:6具有至少60%、70%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、或98%或99%的同一性并且包含至少一组选自上文所述的组的氨基酸取代的氨基酸序列,其中所述变体的氨基酸位点的编号与SEQIDNO:2序列的氨基酸位点相对应。还包括了包含至少一种此类变体的组合物(包括但不限于:例如,清洁组合物)和利用至少一种此类变体的用于清洁的方法,如本文中在别处所详述的。

胺辅助递送(AAD):胺辅助递送技术方法采用包含胺基的材料以在产品使用期间提高香料沉积或调节香料释放。在该方法中不需要在添加至产品之前预络合或预反应所述香料原料和胺。在一个方面,适用于本文的包含胺的AAD材料可为非芳族的,例如聚烷基亚胺,如聚乙烯亚胺(PEI)或聚乙烯胺(PVAm),或芳族的,例如邻氨基苯甲酸盐。此类材料还可为聚合的或非聚合的。在一个方面,此类材料包含至少一种伯胺。不受理论的约束,对于聚合的胺,通过聚合物辅助递送,该技术将允许相对胺官能团同样的低0DT香料香味(如醛、酮、烯酮)增加的保质期和受控释放,以及其它PRM的递送。没有该技术,挥发性的顶香会损失太快,留下中香和底香对顶香更高的比率。聚合的胺的使用允许更高含量的顶香和其它PRM被用来获得新鲜保质期而不会导致纯产品气味比期望的更浓郁,或允许顶香和其它PRM更有效地使用。在一个方面,AAD体系在大于约中性的pH下递送PRM是有效的。不受理论的束缚,其中更多的AAD体系的胺被去质子化的条件会导致对于PRM,如醛和酮,包括不饱和的酮和烯酮,如二氢大马酮去质子化的胺增加的亲和性。在另一方面,聚合的胺在小于约中性的pH下递送PRM是有效的。不受理论的束缚,其中更多的AAD体系的胺被质子化的条件会导致对于PRM,如醛和酮质子化的胺降低的亲和性,和对于广泛范围的PRM聚合物骨架强烈的亲和性。在该方面,聚合物辅助递送可递送更多的发香有益效果;此类体系为AAD的子类,并且可被称作胺聚合物辅助递送或APAD。在一些情况下,当所述APAD被用于具有小于7的pH的组合物中时,此类APAD体系还可被认为是聚合物辅助递送(PAD)。在又一方面,AAD和PAD体系会与其它材料,如阴离子表面活性剂或聚合物相互作用以形成凝聚层和/或类凝聚层的体系。在另一方面,包含不同于氮,例如硫、磷或硒杂原子的材料可被用作替代胺化合物。在又一方面,前述替代化合物可与胺化合物联合使用。在又一方面,单个分子可包含胺部分和一个或多个替代的杂原子部分,例如,硫醇、膦和硒醇。适宜的AAD体系以及其制造方法可存在于US专利申请2005/0003980Al、2003/0199422A1、2003/0036489A1、2004/0220074A1和USP6,103,678中。

iEMS孵育/振荡器(Thermo/Labsystems)被设定在29°C。将培养上清液稀释至包含无压力缓冲液的平板中,使得浓度为约~25ppm(主稀释液平板)。就该检测而言,20μ1的样品被从上述主稀释液平板中添加至包含180μ1的无压力缓冲液的平板中,以得到2.5ppm的最终孵育浓度。将上述内容物混合并置于室温下,在该平板上进行了AAPF检狈L此外,20μ1来自上述主稀释平板的样品也被添加至包含180μ1压力缓冲液(50mM的HEPES(ll·9g/l),0·l%(w/v)D0BS(lg/l),10mM的EDTA(3·36g/l),pH8·0)的平板中。溶液被混合并立即被置于400rpm的29°C的iEMS振荡器中30分钟。孵育30分钟后,在该压力平板上进行了AAPF检测。通过计算残余的与初始的AAPF活性的比率如下:残余活性(%)=*100/,测定了样品的稳定性。

在洗涤剂组合物2中于pH8和16°C进行的BMI微样品清洁检测中,下列BPN'变体被测定为相对于BPN'-v3具有大于1.0、至少1.1、至少1.2、至少1.3、至少1.4、至少1.5、至少1.6、至少1.7、至少1.8、至少1.9、至少2、大于1.0至约10、大于1.0至约8、或大于1.0至约5的PI值:包含至少一组选自由G097A-I111V-M124V-Y217Q,G097A-nilV-Y167A-Y217Q,S024G-N025G-N061P-G097A-S101N-G128S-Y217Q,S024G-N025G-S053G-N061P-G097A-S101N-G128A-V203Y-Y217Q,S024G-N025G-S053G-T055P-N061P-G097A-S101N-G128S-V203Y-Y217Q和V068A-A092G-Y217Q组成的组的氨基酸取代的BPN'氨基酸序列(SEQIDN0:2),其中所述变体的氨基酸位点的编号与SEQIDN0:2的序列相对应。此类变体在这一检测中具有比BPN'(SEQIDNO:2)更强的蛋白水解活性和比BPN'更高的PI值。本发明包括在这一BMI微样品清洁检测中具有比BPN'(SEQIDNO:2)更强的蛋白水解活性和/或相对于BPN'-v3大于1.0至约5的PI值的蛋白酶变体,所述变体包含与SEQIDN0:2具有至少60%、70%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、或98%或99%的同一性并且包含至少一组选自上文所述的组的氨基酸取代的氨基酸序列,其中所述变体的氨基酸位点的编号与SEQIDNO:2序列的氨基酸位点相对应。还提供了在这一BMI微样品清洁检测中具有比BPN'更强的蛋白水解活性和/或相对于BPN'-v3大于1.0的PI值的枯草杆菌蛋白酶变体,所述变体包含与SEQIDNO:2的序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、或98%同一性的氨基酸序列,其中所述变体包含至少一种选自由X024G,X025G,X052L,X053G,X055P,X061P,X062Q,X068A,X089Y,X092G,X096T,X097A,X101N,X104N,X111V,X124V,X126A,X128A/S,X167A,X203Y和X217Q组成的组的取代,和任选地至少一种选自由S024G,N025G,P052L,S053G,T055P,N061P,N062Q,V068A,S089Y,A092G,L096T,G097A,S101N,Y104N,I111V,M124V,L126A,G128A/S,Π67Α,V203Y,Y217Q组成的组的取代,其中所述变体的氨基酸位点的编号与SEQIDN0:2序列的位点相对应。还包括了包含至少一种此类变体的组合物(包括但不限于:例如,清洁组合物)和利用至少一种此类变体的用于清洁的方法,如本文中在别处所详述的。

洗涤剂:热灭活的商品化的Tide2XCold

还提供了在这一在洗涤剂组合物1中于pH8和16°C进行的BMI微样品清洁检测中具有比BPN'更强的蛋白水解活性和/或相对于BPN'-v3大于1.0的PI值的枯草杆菌蛋白酶变体,所述变体包含与SEQIDN0:2具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、或98%的同一性的氨基酸序列,其中所述变体包含至少一种选自由X024G,X025G,X035V,X038G,X053G,X055P,X061P,X078N,X097A,X101N,X116S,X128A/S,X130G,X216Q,X217Q和X249N组成的组的取代,和任选地至少一种选自由S024G,N025G,I035V,S038G,S053G,T055P,N061P,S078N,G097A,S101N,A116S,G128A/S,S130G,Y216Q,Y217Q和S249N组成的组的取代,其中所述变体的氨基酸位点的编号与SEQIDN0:2序列的位点相对应。还包括了包含至少一种此类变体的组合物(包括但不限于:例如,清洁组合物)和利用至少一种此类变体的用于清洁的方法,如本文中在别处所详述的。

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